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耗材專區(qū)血液中咖啡因的測(cè)定

更新時(shí)間:2022-11-11       點(diǎn)擊次數(shù):2387

1、前言

咖啡因是一種黃嘌呤生物堿化合物,是一種中樞神經(jīng)興奮劑,能夠暫時(shí)的驅(qū)走睡意并恢復(fù)精力,臨床上用于治療神經(jīng)衰弱和昏迷復(fù)蘇。有咖啡因成分的咖啡、茶、軟飲料及能量飲料十分暢銷,因此,咖啡因也是普遍被使用的精神藥品。適度地使用咖啡因具有舒張血管、促進(jìn)血液循環(huán)、預(yù)防高血壓、心肌梗塞、利尿、解毒、抗氧化、抗衰老、減肥等藥理和生理作用,但是,大劑量或長(zhǎng)期使用也會(huì)對(duì)人體造成損害,能夠?qū)е?ldquo;咖啡因中毒”,如神經(jīng)過敏,易怒,焦慮,震顫,肌肉抽搐(反射亢進(jìn)),失眠和心悸。中國(guó)把咖啡因列為“精神藥品”管制,屬于一種毒品。目前有關(guān)咖啡因檢測(cè)分析的研究報(bào)道不多,為此本文通過使用SPE 1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)對(duì)人體血液中咖啡因進(jìn)行回收率測(cè)定分析,探索血液咖啡因樣本檢測(cè)的方法。

 

 

2、實(shí)驗(yàn)過程2.1儀器與試劑

 

SPE 1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng),萊伯泰科

 

MV5多通道平行濃縮系統(tǒng),萊伯泰科

 

LC600 二元高壓梯度高效液相色譜,萊伯泰科

 

EZsepTMHLB固相萃取柱,(60mg/3mL北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司 貨號(hào):PZ12602

血液替代品:牛血清,市售

 

2.2工作液配制

 

咖啡因標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:100μg/mL

 

咖啡因標(biāo)準(zhǔn)工作液:取1mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液放入10mL容量瓶中,用甲醇定容配置成10μg/mL標(biāo)準(zhǔn)工作液 

 

2.3實(shí)驗(yàn)部分

 

2.3.1樣品制備

 

取血液樣本1mL加入磷酸鹽緩沖液1mL平衡,加入50μL標(biāo)準(zhǔn)工作液,混合均勻,加標(biāo)濃度為500ng/mL,待固相萃取。

 

2.3.2凈化與濃縮

 

EZsepTMHLB固相萃取柱,(60mg/3mL北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司 貨號(hào):PZ12702)用5mL甲醇乙酸乙酯(11)、5mL水和5mL磷酸鹽緩沖液進(jìn)行活化,取全部樣液上樣,上樣結(jié)束后用2mL磷酸鹽緩沖液和2mL水淋洗萃取柱,在真空狀態(tài)下干燥0.5min,最后用5mL 磷酸鹽緩沖液近干后,用流動(dòng)相定容至1mL 。渦旋混勻,0.22μm濾膜過濾,待檢測(cè)。

 

2.3.3 高效液相色譜檢測(cè)條件

 

色譜柱:Promosil C18,5μm4.6*150mm

 

波長(zhǎng):272nm

 

流速:1mL/min

 

柱溫:40℃

 

進(jìn)樣量:20μL

 

流動(dòng)相:甲醇-= 2476

 

 

3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

 

圖1標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖

 

圖2加標(biāo)樣品色譜圖

 

圖3空白樣品色譜圖表1 加標(biāo)回收率結(jié)果

 

 

4、結(jié)論

本次實(shí)驗(yàn)展示了一種使用EZsepTMHLB固相萃取柱,(60mg/3mL北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司 貨號(hào):PZ12702)對(duì)血液中咖啡因進(jìn)行萃取凈化,其加標(biāo)回收率95.8%~99.2%,重復(fù)性RSD1.6%。說明EZsepTMHLB固相萃取柱適用于血液中咖啡因的檢測(cè),并且在回收率和平行性上表現(xiàn)優(yōu)異。

 

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