簡(jiǎn)介
本方法使用創(chuàng)新型分體式HMR凈化管/96孔板結(jié)合96孔正壓固相萃取裝置一步式凈化血清樣品,再通過(guò)LC-MS/MS進(jìn)行檢測(cè),回收率達(dá)90%左右。樣品處理過(guò)程簡(jiǎn)單,結(jié)果準(zhǔn)確。
方法優(yōu)勢(shì)
Ø 蛋白沉淀和磷脂去除一步完成,可有效去除血清中蛋白、磷脂類化合物對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響
Ø 通過(guò)式凈化,極大簡(jiǎn)化前處理步驟,約1h即可完成前處理操作
Ø 上樣量僅需50μL,大大節(jié)省了寶貴的樣品
Ø 試劑耗材使用量更少,更加環(huán)保節(jié)約
Ø 柱效遠(yuǎn)超直通式SPE,回收率穩(wěn)定,可達(dá)90%左右
配套設(shè)備及耗材
序號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品描述 |
1 | 96孔正壓固相萃取裝置 | EZ PRE-96正壓固相萃取裝置 |
2 | 96孔氮吹儀 | EZ VAP-96氮吹儀 |
3 | 雙位96孔氮吹儀 | EZ VAP-192雙位96孔氮吹儀 |
4 | MixMate® 混勻小精靈 | MixMate®主機(jī),不含樣品管管架,230 V/50-60 Hz(CN) |
5 | 8道移液器 | 8-通道,10-100µL, 可調(diào)量程 |
6 | 超效分體96孔集成板HMR | HMR S-micro BIO 96 Well, 15mg, 1 mL, 1/PK |
7 | 超效分體96孔SPE板HMR | HMR S-micro BIO SPE, 15mg, 1 mL, 100/PK |
8 | 超效96孔板微徑小柱適配器 | Micro columnadapter rack,SUS,1/PK |
9 | 20種全氟混標(biāo)(包含方法中15種全氟) | PFAS Mixture with 20 analytes, 5 µg/mL in Methanol/Water,1mL |
10 | 11-氯-3-氧雜全氟十一烷磺酸鉀 | 50 µg/mL,1mL,甲醇/水,CAS:83329-89-9 |
11 | 13種全氟內(nèi)標(biāo) | Mass-Labelled PFC Extraction Standards Solution 2.0μg/mL 1.2mL |
12 | 血清中全氟質(zhì)控品Y2403 | INSPQ PFC Reference Material Y2403,1/kit |
13 | 血清中全氟質(zhì)控品Y2301 | INSPQ PFC Reference Material Y2301,1/kit |
14 | 血清中全氟質(zhì)控品Y2304 | INSPQ PFC Reference Material Y2304,1/kit |
15 | Leosil C18/PFP核殼柱(GB23200.121方法專用) | Leosil Shell C18/PFP, 2.7µm, 100* 2.1mm, 1/PK |
16 | 96孔收集板 | Collection Plate, 1 mL/Round/U-Shaped, 96 Well, 10/PK |
17 | 封板膜 | 660 Tape Sealing Pad for 96 Well Plate,25 Sheets/Pad,10Pad/pk |
樣品前處理
儀器條件
1)色譜條件
色譜柱:Leosil C18/PFP核殼柱 (2.7µm, 100* 2.1mm)
流動(dòng)相:5mmol/L乙酸銨甲醇(A),5mmol/L乙酸銨水溶液(B)
流速:0.4mL/min
柱溫:50℃
進(jìn)樣量:2μL
流動(dòng)相梯度表
2)質(zhì)譜條件
AB 6500+質(zhì)譜檢測(cè)器采用多反應(yīng)檢測(cè)模式(Multiple
Reaction Monitoring,MRM),ESI負(fù)離子模式。
離子源:電噴霧離子源;
掃描方式:負(fù)離子掃描;
檢測(cè)方式:多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)(MRM);
電噴霧電壓:-4500V;
離子源溫度:400℃;
輔助氣1:60psi;
輔助氣2:60psi;
氣簾氣:30psi;
碰撞氣體:Medium
目標(biāo)PFASs的離子對(duì)、錐孔電壓、碰撞能量等參數(shù)見(jiàn)下表
方法定量限
在以下兩種方法中取最大值作為本項(xiàng)目的方法定量限(Limit of quantification,LOQ):(1)在實(shí)際血清基質(zhì)中滿足信噪比大于10的最低濃度,信噪比采用RMS(Root Mean Square,RMS)方法;(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線工作范圍內(nèi)滿足實(shí)測(cè)濃度在理論值偏差±20%之內(nèi)的最低濃度。由于本研究中樣品未經(jīng)濃縮和稀釋,無(wú)稀釋倍數(shù),因此方法定量限即為LOQ,如下表。
16種PFASs的定量限
回收率和精密度
血清中16種全氟化合物不同水平加標(biāo)回收率和精密度(n=6)
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
1、內(nèi)標(biāo)體積太小(50、20微升),稍微有損失,就會(huì)影響定量,所以建議先加樣品、再加內(nèi)標(biāo),最后加乙腈;
2、加液體過(guò)程中,一定注意盡量讓移液槍的槍頭接近凈化管中最上層篩板加液。需要正確使用移液槍,特別是小體積加樣時(shí);
3、建議分兩次加入乙腈。如果只加一次乙腈,可能洗脫不完全,凈化管里有殘留。壓完一次,加入乙腈,再正壓;
4、乙腈:血清的比例從3:1開(kāi)始優(yōu)化;
5、其他項(xiàng)目根據(jù)化合物的性質(zhì)選擇甲醇或乙腈作為提取溶劑。